CONSTITUYENTES
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
AGAR.-
Agente solidificante sin propiedades nutritivas que se utiliza en la
preparación de medios sólidos y semisólidos. Tiene la ventaja de fundirse a
90°C y al enfriarse permanecer líquido hasta aproximadamente a una temperatura
de 40°C, cuando empieza a solidificar. Es un extracto seco gelificante obtenido
de algunas especies marinas de algas rojas, principalmente de los géneros Gelidium,
Graciliaria, Pteroclaida y Adantopheltis.
PEPTONA.-
Es proteína animal (músculo, hígado, sangre, leche, caseína, lactoalbumina,
gelatina) o vegetal (frijol de soya), hidrolizada por medio de métodos
enzimáticos o químicos.
CARNE.-
Es Músculo, corazón o hígado de bovino, o bien músculo, bazo o placenta de
ternera. Actualmente todo este tipo de proteínas se vende de manera comercial
en forma deshidratada.
EXTRACTO
DE LEVADURA.- Es un derivado de levadura de pan o cerveza que contiene
aminoácidos y vitaminas del complejo B. Se puede sustituir la carne por este
compuesto.
SANGRE.-
Se utiliza sangre de diferentes especies animales, dependiendo de lo que se
quiera trabajar, ya sea de bovino, ovino, equino, conejo e inclusive sangre
humana. En todos los casos ésta debe someterse a un proceso de desfibrinación.
La sangre de oveja se utiliza principalmente para demostrar las hemolisinas del
género Staphylococcus.
SALES
BILIARES.- Actúan como inhibidores de bacterias gram positivas.
SALES
MINERALES.- Se utilizan en la preparación de medios de cultivo definidos, para
estudios de nutrición bacteriana y pruebas de utilización de fuentes de
carbono.
COLORANTES.-
Se utilizan como inhibidores de bacterias gram positivas. Los colorantes que se
utilizan son: el cristal violeta, el verde brillante, la eosina, el azul de
metileno y la fuscina básica entre otros.
CLASIFICACIÓN
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO DE ACUERDO A SU ESTADO FÍSICO:
DUROS
.- Contienen del 3 -7 % de agar y se emplean principalmente para inhibir el
Swarming (crecimiento invasivo por presencia de flagelos), característico de
algunas especies del género Proteus.
SOLIDOS.-
Aquellos medios que contienen de 2 -3 % de agar. Ejemplos: Agar Nutritivo, Agar
Sangre, etc.
SEMISÓLIDOS.-
Contienen de 0.4 a 1.5% de agar. Ejemplos: OF, SIM, MIO, etc.
LÍQUIDOS.-
No contienen agar. Ejemplos: Caldo nutritivo, caldo arginina, caldo BHI, etc.
CLASIFICACIÓN
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO DE ACUERDO A SU USO Y COMPOSICIÓN:
BASICOS.-
Medios simples que contienen los nutrientes esenciales para promover el
desarrollo de microorganismos poco exigentes nutricionalmente. Reciben también
el nombre de medios generales y pueden ser utilizados en análisis
cuantitativos, para muestreos del medio ambiente y superficies y/o para
conservación de cepas. Ejemplos: Caldo nutritivo, agar nutritivo, agar soya
tripticaseína, caldo soya tripticaseína, etc
ENRIQUECIDOS.-
Medios que han sido suplementados con otros nutrientes que proporcionan
“factores de crecimiento” y cuya finalidad es promover el desarrollo de
microorganismos más exigentes. En general son todos aquellos medios adicionados
con sangre, suero, plasma, yema de huevo, líquido ascítico, colesterol,
vitaminas o aminoácidos, etc. Ejemplos: Agar sangre, agar chocolate, agar
suero, agar glicerol, etc.
DE
ENRIQUECIMIENTO.- Utilizados principalmente en los cultivos para
enterobacterias. Son elaborados para aumentar la propagación de ciertos
organismos sin favorecer a otros. Son muy eficaces en el aislamiento de Salmonella a partir de heces fecales.
Ejemplos: Caldo selenito, caldo selenito y cistina, caldo tetrationato, caldo
sal-colistina, agar sangre-levadura de cerveza, agar yema de huevo-leche, etc.
SELECTIVOS.-
Se utilizan cuando se trabaja con muestras que provienen de áreas del cuerpo
que poseen una microbiota normal abundante (faringe, boca, piel, naríz, vagina,
etc.). En estos se incorporan sustancias inhibidoras de la propagación de un
grupo de bacterias, pero permiten en cambio el crecimiento de otros grupos. Así
para el cultivo entérico, los medios suelen contener ciertos colorantes e
ingredientes que inhiben a las bacterias gram positivas y permiten la
propagación de los bacilos gram negativos. Ejemplos: Agar Mac Conkey, agar
verde brillante, agar EMB, etc.
Si
se desean aislar enterococos (gram positivos), se puede incorporar ácido sódico
a los medios como el agar sangre, lo cual inhibe a los gram negativos.
Si
se desea aislar Staphylococcus se
puede agregar a los medios una concentración alta de cloruro de sodio, es el
caso del agar sales y manitol.
Cabe
mencionar que también se logra un efecto selectivo hacia cierto grupo de microorganismos
cuando se varía la temperatura, el pH, la atmósfera, o adicionando antibióticos
a los medios de cultivo, como es el caso del agar soya tripticaseína +
penicilina o bacitracina, utilizado en el aislamiento del género Brucella.
Otros
ejemplos son el medio de Lowenstein – Jensen, utilizado en el aislamiento del
género Mycobacterium y el medio de
Fletcher, útil en el aislamiento de Leptospira.
DIFERENCIALES.-
Debido a los componentes químicos e indicadores que contienen, permiten
identificar con cierta facilidad algunos géneros o especies de bacterias por el
aspecto característico que toman sus colonias. Cabe mencionar que la mayoría de
los medios selectivos son también diferenciales.
PARA
EL ESTUDIO DE CARBOHIDRATOS.- Los carbohidratos y glucósidos son utilizados
como fuente de energía por las bacterias. Para diferenciar géneros e
identificar especies se utiliza por lo general el agua peptonada como base para
determinar la utilización de los azúcares, adicionando éstos en solución al 10%
de manera individual en tubos diferentes. Las soluciones de carbohidratos
empleadas para estas pruebas deben ser esterilizadas por filtración, pues son
termosensibles, pues si se sobrecalientan sufren cambios tales como la
hidrólisis de los azúcares complejos, la formación de productos de oxidación o
pueden reaccionar con algunos otros componentes del medio, como los
aminoácidos, alterando los resultados.
La
descomposición por calor de un carbohidrato se manifiesta por una baja del pH y
por la caramelización (obscurecimiento) del medio.
Los
medios con carbohidratos pueden esterilizarse en autoclave, siempre y cuando se
realice cuidadosamente a 110°C con 10 libras de presión de vapor durante 10
minutos (en vez de hacerlo a 121°C, 15 lb, 15 minutos).
Ejemplos
de estos medios son medio basal OF de Hugh y Leifson, medio de Clark y Lubs
para prueba de MR-VP, caldo lactosado rojo de fenol, etc.
DE
TRANSPORTE.- Son utilizados en el envío de muestras al laboratorio. Contienen
agentes reductores o nutrientes que permiten a los microorganismos conservarse
hidratados y viables hasta llegar al laboratorio. Ejemplos: Medio de transporte
de Stuart, Caldo Tioglicolato, Caldo Nutritivo, Medio de Carry - Blair, etc.
